驱白巴布期片对小鼠免疫功能有什么影响？

  驱白巴布期片为传统的治疗白癜风的维吾尔药物，从维吾尔医理论出发驱白巴布期片是通过调节人体内的四种“赫立特”的平衡、通脉、理血从而达到治疗白癜风的目的。然而，现代医学研究白癜风的发病机制目前尚不清楚，存在多种假说，其中大量资料表明白癜风的发病与自身免疫有关。但驱白巴布期片对机体免疫功能影响的相关研究方面仍属空白。鉴于此，本实验研究从非特异性免疫(巨噬细胞吞噬功能)及特异性细胞免疫(脾淋巴细胞增殖)两个方面进行研究。

1 材料

1.1 药材与试剂  复方驱白巴布期片(由新疆华康制药公司提供，批号：20070123)。环磷酰胺，200 mg／支，(江苏恒瑞医药股份有限公司生产，批号：20070328)；盐酸左旋咪唑片(山东省莒南制药厂，批号：20070123)；RPMI1640培养液(GIBCO公司)；四甲基偶氮噻唑蓝(MTr，美国Sigam公司)；刀豆蛋白(ConA，美国Sigam公司)；脂多糖(LPS，美国Sigam公司)；小牛血清(杭州四季清生物公司)；淀粉肉汤；5％鸡红细胞混悬液[自制：取鸡血用生理盐水经1 500 r／rain，离心5 rain，洗涤3次，配制成5％( V/V)鸡红细胞混悬液]。

  1.2 仪器  CO：培养箱，全自动酶标仪，全自动生化分析仪，电子分析天平，显微镜等。

1.3 动物昆明小鼠，120只，雄性(20±2)g，由新疆自治区疾病控制中心实验动物中心提供。

2 方法

按完全随机化设计方案，将120只小鼠分为12组，每组10只，再将12组动物分为A、B两部分，每部分6组，具体分组及给药操作：正常对照组，灌胃以生理盐水；模型组；阳性对照组，每天灌胃以左旋咪唑；驱白巴布期混悬液高剂量组；驱白巴布期混悬液中剂量组；驱白巴布期混悬液低剂量组。每组动物，正常饮食饮水。阳性对照组每天给左旋咪唑0.25 mg／(10 g·d)；配制6.5％的驱白巴布期片混悬液，高剂量组小鼠灌胃2次／d，0.3 ml／次；中剂量组小鼠灌胃2次／d，0.2 rnl／次；低剂量组小鼠灌胃1次／d，0.2 ml／次；正常对照组和模型组灌胃生理盐水0.2 ml。除正常对照组外，其余5组于实验开始日一次性予以腹腔注射环磷酸胺(300 mg／)，诱导建立小鼠免疫功能低下模型。连续给药10 d。

  3 结果

3.1 对小鼠体重及脾脏重量及免疫球蛋白IgC，IgM，IgA的影响  A部分小鼠末次用药后禁食，于末次给药后24 h处死A组小鼠，取脾，取胸腺，称重，计算脾脏、胸腺指数(mg／l0g体重)，并摘眼球取血，分离血清用于测定免疫球蛋白IgG，IgM，IgA。数据进行组间t检验。

  3.2 对小鼠淋巴细胞增殖作用的影响(MTT法)  取上述A部分小鼠秤过体重后，用75％酒精浸泡5rain，无菌操作取脾，称重后，放人装有5 ml Hankerg液的平皿中，用200目钢网研磨过筛，制成细胞悬液。取出100µl用于计数。将其余细胞悬液移入离心管中，离心1 500 r／rain，5 min，弃去上清，用完全1640培养液稀释，制成1.0×107／ml的脾细胞悬液，细胞培养采用96孔培养板，每孔加入脾细胞悬液100µl，平行3个复孔，然后加入使得孔最终浓度为5 g／ml的脂多糖(LPS)和刀豆蛋白(Con A)液10 l，同时做不加Con A、LPS的阴性对照孔，37°C，5％CO2培养箱中培养48 h，于培养结束前4 h加入MTr，每孔10µl (5mg／m1)，培养结束后，弃上清液后每孔加入100µl二甲基亚矾(DMSO)裂解液，吹打混匀，用全自动酶标仪在490 nm处测定每孔OD值。

  3.3 腹腔巨噬细胞吞噬功能实验  B组小鼠于实验第l0天末次给药后1 h，给各组小鼠腹腔内注射淀粉肉汤1 ml／只，1h后每鼠腹腔注射5％鸡红细胞悬液1.0 ml。于注射鸡红细胞后2 h，将小鼠脱颈椎处死仰卧位固定于鼠板上，经腹腔注射生理盐水1.0 ml，轻轻按摩小鼠腹部l min，然后剪开腹壁，抽取小鼠腹腔洗液滴于2张干净的载玻片上，每片0.2 ml涂片。将涂片置于恒温37°C孵育箱中温育40 min，使载玻片上腹腔洗液干燥。干燥后用乳头吸管抽取生理盐水轻轻冲洗，以洗去未贴片的细胞，晾干，95％ 乙醇中固定15 rain，用吉姆萨一瑞氏液染色15 min，用蒸馏水轻轻冲洗，晾干。在显微镜下每片计数100个巨噬细胞，计数已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞个数。按下列公式计算每鼠巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数。数据进行组间t检验。

  吞噬百分率(％)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数／100个巨噬细胞。   4、讨论

胸腺是T淋巴细胞分化成熟的中枢免疫器官，脾脏则是体内最重要的外周免疫器官，也是T，B淋巴细胞定居和接受抗原刺激后产生免疫应答的重要场所，它们与机体的细胞免疫和体液免疫密切相关，在免疫功能低下时常有胸腺、脾脏萎缩，体积变小。实验结果提示，在环磷酰胺对小鼠形成免疫抑制的实验条件下，驱白巴布期片能使实验动物胸腺重量增加，高剂量使脾脏重量增加更为显著。巨噬细胞是一类几乎参与一切免疫反应的细胞，在调节淋巴细胞功能和免疫应答上的重要作用已为人们所重视，其主要功能包括分解各种异物并与之相互作用、刺激和增进淋巴细胞的免疫活性。实验结果显示驱白巴布期片可以提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬作用。